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    45T人神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白ELISA檢測試劑盒的試驗步驟

    發(fā)布時間: 2013-01-04  點擊次數(shù): 804次

    上海研域網(wǎng)絡有限公司專業(yè)供應各種屬ELISA試劑盒,金標試劑盒,細胞株,抗體,生物試劑,生物耗材,食品檢測試劑盒,放免試劑盒,胎牛血清,提供免費代測服務,保證實驗結果客觀真實性。我公司對試劑盒質量100%保證,若存在質量問題,我們無條件包退換。

    人神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白ELISA檢測試劑盒

    試驗原理:
        GFAP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知GFAP濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將GFAP和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中GFAP的濃度呈比例關系。

    自備材料
    蒸餾水。
    加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
    振蕩器及磁力攪拌器等。

    安全性
    避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
    實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
    不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

    人神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白ELISA檢測試劑盒

    操作注意事項
    試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
    實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
    不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
    使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
    使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
    底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
    加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
    按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

    人神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白ELISA檢測試劑盒

    樣品收集、處理及保存方法
    血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
    血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
    細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
    組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
    保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    人神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白ELISA檢測試劑盒

    操作步驟
    使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
    根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
    加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
    甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
    每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
    每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
    取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
    在450nm波長處測定各孔的OD值。

    局限
    6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。

    人神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白ELISA檢測試劑盒

    試劑盒性能
    1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
    2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
    3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

    結 果 判 斷 與 分 析
    1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
    2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的GFAP標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的GFAP含量可根據(jù)其OD值由標準曲線算出相應的濃度。
    3、檢測值范圍:0-800pg/ml
    4、敏感度: 1.0 pg/ml
    Patched/PTCH (Patched protein homolog 1) Hh信號轉導途徑膜蛋白受體抗體 0.2ml
    Goat anti-mouse IgG/FITC 熒光素標記羊抗小鼠IgG 0.3ml
    Goat anti-mouse IgM/FITC 熒光素標記羊抗小鼠IgM 0.3ml
    Goat anti-Rabbit IgG/FITC 熒光素標記羊抗兔IgG 0.3ml
    Goat anti-Rb IgM/FITC 熒光素標記羊抗兔IgM 0.3ml
    CD63/MLA1 抗黑色素瘤相關抗原(溶酶體膜糖蛋白)抗體 0.2ml
    CD66a/CEACAM1 癌胚抗原相關細胞粘附分子1抗體 0.2ml
    PTEN/MMAC1(NT) 一種腫瘤抑制基因(N端) 0.2ml
    若需要了解試劑盒的詳細信息,詳情:謝明: 

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