腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒實驗需求
發布時間: 2015/9/21 點擊次數: 667次
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腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的器材 (1) 聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標板)40孔或96孔,人ELISA試劑盒ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。 (2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。 (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。
腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的試劑 (1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液): NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml (2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸餾水至1000ml (3) 稀釋液: 牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 人ELISA試劑盒加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。 (4) 終止液(2M H2SO4): 蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。 (5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸): 0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml 0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml 加蒸餾水50ml。 (6) TMB(四甲基聯苯胺)使用液: TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml 底物緩沖液(PH5.5) 10ml 0.75%H2O2 32μl (7) ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物緩沖液(PH5.5) 1ml 3%H2O2 2μl (8) 抗原、抗體和酶標記抗體。 (9) 正常人血清和陽性對照血清。
腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒的包被: 包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時間,包被液的pH等應根據試驗的特點和材料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置一夜,37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化,每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒的封閉: 封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占據的空隙,封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙,從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質的再吸附。封閉的手續與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,其zui大的特點是價廉,可以高濃度使用(5%)。高質量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封閉劑使用,但由于奶粉的成份復雜,而且封閉后的載體不易長期保存,因此在試劑盒的制備中較少應用。
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