雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
發(fā)布時間: 2020/9/3 點擊次數(shù): 955次
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研域(上海)化學試劑有限公司 |
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雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒 本試劑盒僅供研究使用。 檢測范圍:96T 2ng/L -80ng/L 使用目的: 本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)含量。 實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)。用純化的雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH),再與 HRP標記的促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)抗體形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)濃度。, 試劑盒組成 雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標本要 1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融 2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過(HRP)活性。 操作步驟 1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后37℃溫育30分鐘。 4.配液:將 30倍濃30秒后棄去,如此靜重復 5次,拍干。 5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,30倍稀釋后備用。 6.加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。 7.溫育:操作同 3。 8.洗滌:操作同 5。 9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。| 10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。 11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。
雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總: 計算 以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項 1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2.濃洗滌液可能會有析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響。 3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值大于標準品孔第孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉 6.底物請避光保存。。 7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗. 8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9.本試劑不同批號組分不得混用。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月 |
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